1、如果有标准曲线，按照标准曲线计算。一般都是相对量，则用delta delta CT方法来计算。举例如下：对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin）CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
2、数据分析基线数据分析基线数据分析基线数据分析基线数据分析阈值线数据分析阈值线常见问题分析PCR扩增抑制（以Bio-CFX96为例）扩增曲线荧光强度大小及Ct值大小可提示存在抑制。H07存在扩增抑制；解决方法：将样本稀释后进行扩增。
3、实时荧光定量PCR（qPCR）是一种精确测定DNA扩增过程中目标序列含量的实验技术，其数据处理与理解是关键。这个技术利用荧光标记的PCR产物在每次循环后的积累来实时监测，从而得出Ct值，进而推断模板基因的浓度。基本原理上，PCR反应过程被划分为四个阶段：基线期、指数增长期、线性增长期和平台期。
4、计算方法就是R＝2-ΔΔCt，现在很多仪器你只要设置的时候明确标出内参基因和目的基因，这个结果也是会有自带软件给计算出来的。如果你是做绝对定量，那更方便，你只要在仪器设置的时候把你的标准品含量依次输入，最后软件会自动生成标准曲线什么的，你最后只要分析og sq的结果就可以了。
qRT-PCR是一种相对表达定量的方法，他的计算方法有很多，常用的相对定量数据分析方法是KJ Livak（Applied Biosystems）等人在2001年提出的“比较Ct法相对定量”，即：利用ΔCt值差异来推算基因表达差异（Ct目的基因 – Ct内参基因 = ΔCt），该方法的具体计算方法请参见文章： qRT-PCR相对定量计算详解 。
首先要定义基因集（gene set），也就是基于我们的先验知识（基因组注释信息），将基因富集，可以想象成，用一堆代表基因功能的箱子（bin）把具有相同或相似功能的基因装起来，起到了降维的作用，当然，每个基因可能同时参与好几种功能，这种cross-talk我这里就不说了。
1、PCR（聚合酶链反应）是生物学领域里一项重要的实验技术，广泛应用于DNA扩增和基因检测等方面，而其中的r平方则是PCR分析中的一个关键指标。简单来说，r平方是用来评估PCR分析数据拟合程度的指标，反映测量值与估计值之间的相似度，取值范围为0-1之间。
2、这个应该是你的模板没稀释准确，或者浓度不合适，如果是数据不成直线，全还是很平滑的曲线，可以勉强用曲线处理。如果不平滑，R方值很小，恐怕结果不太可靠了，只得重做，如果不能重做，只能舍弃不好的数据，用另几个数据得到方程，算出结果，但结果的可靠性就差了，只能对付一下。
3、正向引物，反向引物。引物自身及引物之间不应存在互补序列。连续互补的碱基应该要少于4 个。引物应使其G值不要太高，G值越大，则双链越稳定。引物长度和GC 含量要适中。
4、PC是指PC级双电源；R是指自投自负（就是在常用电源出现异常后，双电源会转换至备用电源，而当常用电源恢复后，则转换至常用电源，反之则属于自投不自复）。
5、在同一管中做RT，其实没有什么问题，不需要taq魅加量，taq酶本来就是过量的^-^，（平时做pcr的时候，完全可以再省一些taq酶的，半斤八两 就可以了，我想这肯定再很多贴子里应该都谈到了。Mg就跟不能变了，一变整个体系就变了。能看到均一条带就很好了。
